分光熒光光度計測試時有哪些注意事項?
分光熒光光度計是一種測量熒光光譜的儀器。目前已經廣泛應用于各行各業,特別是醫學領域。由于分光熒光光度計使用方法簡單,測量結果準確,所以更受市場歡迎。但是使用分光熒光光度計時一定要注意方式方法,否則會造成測量數據不準確,影響實驗效果。以下是詳細的注意事項:
①樣品應盛在四面透光的石英比色皿(熒光池)中,如果是揮發性樣品應使用帶塞的熒光池。
②在使用分光熒光光度計熒光分析時,為了得到穩定可靠的數據,一般需要開機預熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,預熱時間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質,可以降低人射光強度或縮短光照時間。
③溫度變化可引起分光熒光光度計熒光強度的改變。通常降低溫度,有利于提高熒光量子產率,熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異,大部分熒光物質的熒光強度受溫度影響不大,測試溫度變化不超過±3℃,對測試結果幾乎無影響。
④當分光熒光光度計的熒光物質是弱酸或弱堿時,溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中,分子和離子的電離平衡會發生改變,而熒光物質的熒光強度會因其離解狀態發生改變。
⑤分光熒光光度計的熒光物質分子與溶液中其它物質分子之間作用導致熒光強度降低,常見的熒光猝滅劑,如鹵素離子、氧氣重金屬離子、硝基化物質、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質產生不同程度的熒光熄滅現象,因此,在較嚴格的熒光實驗中必須除氧。